抗原修復(fù)鍋的這些注意事項(xiàng)要牢記
抗原修復(fù)鍋看上去像我們烹飪的高壓鍋，這是一款功能*的“高壓鍋”，主要用于抗原暴露的工作，主要的工作原理也是裝玻片的幾個(gè)分室可以達(dá)到高溫(>120°C)高壓。靈敏的傳感控制器來(lái)保持一定的溫度和壓力及一定的時(shí)間，這些工作參數(shù)都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)。當(dāng)達(dá)到需要的溫度，抗原修復(fù)鍋會(huì)在該溫度下保持幾分鐘，之后鍋內(nèi)玻片被冷卻2個(gè)多小時(shí)，特殊設(shè)材質(zhì)的內(nèi)鍋體控制了鍋和玻片的冷卻速度。
抗原修復(fù)鍋的注意事項(xiàng)：
1、PH值的應(yīng)用范圍及選擇。
應(yīng)用于抗原修復(fù)的物質(zhì)很多，但至今為止，大家覺(jué)得的較好的抗原修復(fù)液還是檸檬酸鹽緩沖液PH6.0，據(jù)多年來(lái)的實(shí)踐認(rèn)為，該液確實(shí)很好，它適合于大多數(shù)的抗原，在常規(guī)應(yīng)用的臨床標(biāo)記抗體中基本都適用，經(jīng)用該液修復(fù)后的抗原表達(dá)增強(qiáng)，抗原的定性和定位很理想，結(jié)果不錯(cuò)。
2.抗原修復(fù)時(shí)應(yīng)選擇溫度。
70℃－90℃的溫度對(duì)沒(méi)有經(jīng)固定的蛋白可發(fā)生變性，但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白，要使其發(fā)生變性，溫度必須在92℃↑。據(jù)實(shí)驗(yàn)認(rèn)為溫度在92℃－98℃是合適的，尤其在95℃為較好，這是因?yàn)椋孩龠@種溫度未達(dá)沸騰，切片不容易脫離裁片；②能夠解離和破壞與蛋白交聯(lián)的甲醛醛鍵等，處理時(shí)可以隨意選擇和確定抗原修復(fù)鍋的抗原修復(fù)作用時(shí)間。
3.抗原修復(fù)鍋工作時(shí)有效溫度所需持續(xù)時(shí)間根據(jù)各單位的設(shè)備條件以及使用的儀器不同，抗原修復(fù)時(shí)在有效的溫度范圍內(nèi)所持續(xù)的時(shí)間也不一樣。例如：真空負(fù)壓抗原修復(fù)法，當(dāng)達(dá)到預(yù)定的溫度和所需的負(fù)壓（66.7KPa）后可持續(xù)5-10分鐘，微波輻射抗原修復(fù)法溫度不好控制，抗原修復(fù)液容易沸騰，如果切片附貼任憑其沸騰持續(xù)5-10分鐘。如果切片附貼很牢固，為了防止脫片，一發(fā)現(xiàn)抗原液已沸騰，即可關(guān)掉電源，待溫度下降后，又可重開(kāi)電源。如此反復(fù)數(shù)次，使之持續(xù)10分鐘。不過(guò)似這種停停開(kāi)開(kāi)著的做法效果不如開(kāi)著的，因?yàn)殚_(kāi)著的除了熱效應(yīng)以外，還有足量的微波輻射。應(yīng)用高壓抗原修復(fù)法，當(dāng)發(fā)現(xiàn)抗原修復(fù)液沸騰后，加上壓力閥，出現(xiàn)噴氣后，可持續(xù)時(shí)間達(dá)2-4分鐘。隔水熱加熱抗原修復(fù)法，要特別注意內(nèi)外液體的溫度，內(nèi)液指抗原修復(fù)液，外指浸泡抗原修復(fù)液容器的水，應(yīng)用時(shí)用溫度計(jì)浸入抗原修復(fù)液測(cè)試，使之保持在有效的溫度（92℃↑）范圍內(nèi)。持續(xù)時(shí)間在40分鐘，電爐加熱抗原修復(fù)法，其持續(xù)時(shí)間在10分鐘以上。由于效果較差，該法目前較少使用。
4.抗原修復(fù)液必須遵循自然降溫規(guī)律，否則效果不好或達(dá)不到抗原修復(fù)的目的。
抗原修復(fù)持續(xù)時(shí)間過(guò)后，取出放于室溫中讓其慢慢地降溫，決不能為了爭(zhēng)取時(shí)間，強(qiáng)行用冰塊或冷水令其降溫。這是因?yàn)楫?dāng)高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其它的束縛或聯(lián)結(jié)，要有一個(gè)自然環(huán)境讓其自然放松下來(lái)，隨著溫度的降低，它們會(huì)慢慢地恢復(fù)原來(lái)的形態(tài)和構(gòu)型。如果用冰塊和冷水強(qiáng)行令其降溫，松開(kāi)后的蛋白分子肽鏈突遇降溫而固定下來(lái)，恢復(fù)不了原有的構(gòu)型，抗原修復(fù)鍋就達(dá)不到預(yù)想的效果。
